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            學術天地
            學會簡介

              廣東省畜牧獸醫學會是由廣東省民政廳批準成立的具有法人資格的全省性社會團體,是廣東省科學技術協會的組成部分,是黨和政府聯系畜牧獸醫科技工作者的橋梁和紐帶,是發展我省畜牧獸醫事業的重要社會力量?,F任理事長是廖明同志。

             
            張強:CHO表達系統提供優質重組蛋白支撐科研與醫療發展
            現代生命科學研究,甚至疾病治療以及檢測與防控中,重組蛋白均扮演著至關重要的角色,而重組蛋白表達質量的高低往往又影響著它作用的發揮。目前主要發展出了4類表達系統,包括細菌表達系統,酵母表達系統,昆蟲表達系統以及哺乳動物細胞表達系統,其中,哺乳動物細胞表達系統因其翻譯后修飾使得蛋白更接近天然結構而應用廣泛。在第33屆廣東畜牧獸醫科技大會豬病論壇上,來自浙江海隆生物科技有限公司張強博士做了題為《CHO細胞系表達系統介紹及應用》專題報告。


            △浙江海隆生物科技股份有限公司張強博士


            當前對于重組蛋白的應用主要是藥物和病毒兩方面,藥用蛋白包括抗體、凝血因子、激素、生長因子等真核細胞產物,而病毒的繁殖、修飾、加工、包裝、出芽等在真核細胞中進行,他們的生成過程都需要真核細胞的加工修飾,而哺乳動物細胞表達蛋白,不僅可溶且具有接近真實的加工和修飾作用,成為這類蛋白生產的最好工具。常用于重組蛋白表達的哺乳動物細胞包括中國倉鼠卵細胞(CHO)、小鼠腎細胞(BHK)、人胚胎腎細胞(HEK293)、人胚胎視網膜細胞(PER.C6)、小鼠胸腺瘤細胞(NS0)和小鼠骨髓瘤細胞(SP2/0),其中CHO和HEK293已經開發出了不同的亞細胞系。CHO細胞表達系統因具有完整的哺乳動物細胞糖基化修飾,缺少分泌內源蛋白,易懸浮培養,安全性高,對病毒不敏感的優勢,最常用于大規模生產。

            CHO細胞系表達系統以增加產量,降低成本為目的進行開發。通過對載體進行改造,如載體表達框架的優化,包括啟動子,內含子,順勢調控原件,miRNA,篩選標記基因等,克隆位點效應,定點整合等。選擇不同轉染方式,如電轉、化轉以及病毒轉染都各有優勢。CHO細胞系本身進行改造,如基因突變,已構建了基因突變細胞系CHO-DXB11,CHO-DHFR-/-),定點缺失,靶向敲除DHFR、GS基因,促凋亡蛋白BAK、BAX,以提高外源基因的擴增。此外優化培養基和培養條件,商業化培養基、個性化培養基以及保護劑和氨基酸等補料等,pH值、溫度、轉速等均影響著細胞生長狀態,進而影響蛋白的表達質量。

            張強博士表示,全球目前已上市的基于哺乳動物細胞生產的生物制品超過100多種,其中80%是基于CHO細胞表達系統,如呼吸道合胞體病毒亞單位疫苗的開發,重組豬瘟E2蛋白亞單位疫苗和流行性腹瀉亞單位疫苗的研發等。CHO細胞表達系統因其固有優勢,和未來對于表達系統更適合的優化,會表達出更優質的重組蛋白,為科研以及醫療提供更穩定的支撐。



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